Note

Microbiota of Karakačanski skakutanac, an artisanal fresh sheep cheese studied by culture-independent PCR-ARDRA and PCR-DGGE

PCR-ARDRA 和 PCR-DGGE 法研究新鲜羊乳干酪 (Karakačanski skakutanac) 中微生物菌群

Évaluation de la microflore du Karakačanski skakutanac, un fromage frais artisanal au lait de brebis, par les méthodes culture-indépendantes PCR-ARDRA et PCR-DGGE

¹ Department of Dairy Science, Faculty of Agriculture, University of Zagreb, Croatia
² CIRVE, Centro Interdipartimentale per la Ricerca in Viticoltura ed Enologia, Università di Padova, Conegliano (TV), Italy
³ Dipartimento di Biotecnologie Agrarie, Università di Padova, Legnaro (PD), Italy
⁴ Chair of Dairy Science, Biotechnical Faculty, University of Ljubljana, Slovenia

^* Corresponding author (通讯作者): tpogacic@agr.hr, tpogacic@gmail.com

Received: 29 May 2009
Revised: 13 January 2010
Accepted: 18 January 2010

Abstract

Karakačanski skakutanac is an artisanal fresh sheep cheese produced on a small scale in a limited area of eastern Croatia. It is manufactured from unrefrigerated raw sheep milk immediately after milking, without the addition of starter culture, and coagulated with industrial rennet. To date, no microbiological or molecular characterization of the biodiversity of the microbiota has been performed. The objective of this study was to obtain an initial insight into the biodiversity of the microbial community associated with this cheese during the production season and shelf life period. Eleven cheeses were obtained from a dairy farm at 14-day intervals during the lactation period of east Friesian sheep in 2007. Bacterial DNA was isolated directly from cheese on the first, second and third day of the cheese shelf life, resulting in a total of 33 DNA samples. Extracted DNA was used as a template for PCR-ARDRA and PCR-DGGE analysis. The use of dual culture-independent approaches revealed similar results and indicated predominance of Lactococcus lactis.

摘要

Karakačanski skakutanac 是一种手工制作的新鲜羊乳干酪，产于克罗地亚东部某些特定地区。 采用刚挤下来的羊乳制作，不添加发酵剂而以工业凝乳酶凝乳。 目前尚无其微生物菌群生物多态性的微生物特征或分子特征的报道。 本研究对该干酪的生产和储存过程中有关微生物菌群的生物多样性变化进行了初步探讨。 每隔 14 天对 2007 年东部弗里斯兰产的干酪取一次样，共 11 批。 在干酪成熟的第一天、第二天和第三天直接从干酪中提取细菌 DNA，得到 33 个 DNA 样品。 提取得到的 DNA 用作 PCR-ARDRA 和 PCR-DGGE 分析的模板。 两种方法鉴定的结果一致，并发现乳酸乳球菌 (Lactococcus lactis) 是优势菌种。

Résumé

Le Karakačanski skakutanac est un fromage frais artisanal, produit à petite échelle dans une aire limitée de l’est de la Croatie. Il est fabriqué juste après la traite à partir de lait cru de brebis non réfrigéré, sans addition de levains, et coagulé par de la présure industrielle. La biodiversité de la microflore n’a jusqu’à présent jamais été caractérisée, ni par des méthodes microbiologiques classiques ni par des méthodes moléculaires. L’objectif de cette étude était d’obtenir un premier aperçu de la biodiversité de l’écosystème bactérien associé à ce type de fromage au cours de la période de production et de la durée de conservation. Onze fromages ont été collectés en 2007 d’une ferme laitière tous les 14 jours durant la période de lactation de brebis de race Frisonne. L’ADN bactérien a été isolé directement du fromage les 1^er, 2^e et 3^e jours de stockage, donnant 33 échantillons. L’ADN extrait était utilisé pour analyse par PCR-ARDRA et PCR-DGGE. Les deux méthodes culture-indépendantes mises en œuvre ont conduit à des résultats similaires montrant la prédominance de Lactococcus lactis.